低温变性下复合PCR技术及其应用

梁卉,陈国杰,于燕,熊礼宽

Co-amplification at lower denaturation temperature-PCR: methodology and applications

Liang Hui,Chen Guojie,Yu Yan,Xiong Likuan

表1 COLD-PCR的方法学比较

Table 1 Comparison of COLD-PCR methods

常规PCR Full COLD-PCR Fast COLD-PCR Ice-COLD-PCR E-ice-COLD-PCR TT-COLD-PCR 突变类型 - 所有类型 Tm降低突变 所有类型 所有类型 所有类型 富集倍数 - 3~10倍 10~100倍 16倍 ~16倍 6~17倍 时间 - 耗时 快速 较耗时 最快 最耗时 RS/浓度 - - - 有(任意链 20 nmol/L ) LNA(不能为GC突变链10 nmol/L) - Tc范围 - ±2℃ ±2℃ ±2℃ 5~10℃ 2.5~3℃ 预扩增 - 需要 需要 需要 不需要 需要 杂交时间 - 2~8 min - 30 s 30 s 2~8 min Sanger测序 10%~30% 3% 0.5% 1% 0.1% 3% 焦磷酸测序 ~10% 0.5%~1% 0.1% 0.01% - 高分辨熔解曲线 (HRM) 5%~10% 1~2% 2% - - 3% 数字PCR 0.1 % - 0.2%~1.2% - - - 第二代测序技术 (NGS) 2%~5% - 0.02%~0.2% - 0.01%~0.1%