不同单细胞全基因组扩增方法的比较及MALBAC在辅助生殖中的应用

姚雅馨,喇永富,狄冉,刘秋月,胡文萍,王翔宇,储明星

Comparison of different single cell whole genome amplification methods and MALBAC applications in assisted reproduction

Yao Yaxin,La Yongfu,Di Ran,Liu Qiuyue,Hu Wenping,Wang Xiangyu,Chu Mingxing

表1 不同单细胞全基因组扩增方法的优缺点比较

Table 1 The validation of different single cell WGA methods

WGA技术 原理 优点 缺点 参考文献 MALBAC 多重退火环状循环扩增技术结合恒温扩增与PCR法 操作简单,产量高,最低起始模板几个pg,结果可靠可重复,且灵敏度高,扩增均衡度高 起始模板量极低时扩增难度加大;模板拷贝数极低时易扩增偏差,可能出现非特异性扩增 [12,16] DOP-PCR 部分随机引物法基于PCR法 操作简单,最低起始模板量达 50 pg,产物片段大小0.5~10 kb 起始模板量低时扩增偏差大 [6~8] PEP-PCR 完全随机引物法基于PCR法 对模板DNA质量要求低,操作简单,易改进,50 ng 起始模板可产0.2~0.5μ g产物,最低起始模板量可达5 pg 产量低,保真性差;使用随机引物易产生扩增偏差及片段丢失 [21,22] MDA 多重置换扩增恒温扩增法 产量高,50 ng起始模板量可产生10~20 μ g产物,最低起始模板量可达10 pg,忠实性好 起始模板量低时扩增偏差大,对模板质量要求高,可能产生非特异性产物 [10,11]