MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率

欧浩,李国玲,王豪强,黄广燕,蔡更元,李紫聪,吴珍芳,张献伟

MEK inhibitor PD0325901 significantly boosts ssODN-mediated HDR efficiency in porcine fetal fibroblasts

Ou Hao,Li Guoling,Wang Haoqiang,Huang Guangyan,Cai Gengyuan,Li Zicong,Wu Zhenfang,Zhang Xianwei

图3 PD0325901对ssODN介导的HDR效率的影响 A：ssODN介导的HDR报告载体修复模式图;B：报告载体HDR修复效率的流式细胞术检测结果(用EGFP荧光细胞百分比表示HDR效率);C：PD032590处理组间ssODN介导报告载体HDR修复的效率比较(n=3)。* P<0.05,表示差异显著,** P<0.01表示差异极显著;D和G：ssODN介导HindⅢ识别序列定点整合至猪基因组模式图。D图为DMD基因位点,G图为ROSA26基因位点;E和H：核酸内切酶酶切法检测DMD位点(图E)和ROSA26位点(图H)编辑效率电泳结果。T7 EndoⅠ为T7核酸内切酶Ⅰ酶切电泳图,图上的数字表示灰度扫描数值,代表目标位点发生DSB的效率;HindⅢ为HindⅢ限制性核酸内切酶酶切电泳图,图上数字表示灰度扫描数值,代表目标位点HindⅢ定点整合效率;F和I：分别为图E和图H灰度扫描值的柱状图展示结果(HDR效率= HindⅢ灰度扫描值/T7 EndoⅠ灰度扫描值,n=3);J和K：分别为定点整合HindⅢ识别序列至DMD(图J)和ROSA26(图K)基因位点的测序峰图。

Fig.3 The ssODN-mediated gene editing efficiency after treatment with PD0325901