利用CRISPR/Cas9和piggyBac实现果蝇基因组无缝编辑

王珏,黄娟,许蕊

Seamless genome editing in Drosophila by combining CRISPR/Cas9 and piggyBac technologies

Wang Jue,Huang Juan,Xu Rui

图1 基因敲入突变体的设计及鉴定 A：CG4894基因转录本第18外显子示意图。下方为CG4894基因转录本示意图(引自Flybase数据库),方框标记表示部分转录本C、E、H和J共有的第18外显子,上方为这一外显子及其上下游序列,阴影部分为目标突变位点,实线下划线为TTAA序列,虚线下划线为sgRNA序列,加点CCA为PAM序列;B：CG4894基因点突变体构建示意图。三角形标记为基因组中目标点突变位置,五角星标记为供体DNA质粒携带的点突变,sgRNA*表示供体DNA质粒上的sgRNA携带同义突变;C：CG4894基因敲入果蝇跨同源臂PCR鉴定结果。M：100 bp DNA maker;1-1、5-1、5-2为携带DsRed筛选标记的转基因果蝇品系;WT：野生型果蝇。

Fig. 1 The design and molecular verification of CG4894 knock-in flies