染色质架构蛋白CTCF调控UGT1基因簇的表达

郑晓飞,黄海燕,吴强

Chromatin architectural protein CTCF regulates gene expression of the UGT1 cluster

Zheng Xiaofei,Huang Haiyan,Wu Qiang

图3 CRISPR反转hCBS1片段对人细胞系A549中UGT1基因簇转录的影响 A：CRISPR反转hCBS1片段所使用的成对sgRNA (sgCIU和sgC1D)以及各鉴定引物的位置示意图;B：hCBS1片段反转示意图。Cas9在sgCIU和sgC1D引导下,特异性识别hCBS1片段两侧靶标位置并切割产生两个切口,hCBS1反转后两个切口分别连接到染色体断点处形成hCBS1片段反转的编辑细胞;C：hCBS1片段反转的单克隆A549细胞株C1I4的基因型鉴定结果。野生型A549细胞(WT)被作为PCR鉴定对照;用C1F5/C1R6或C1F2/C1R引物对可在WT中扩增出切点处244 bp或301 bp的野生型条带,C1I4中检测结果均为阴性;用CBS1反转检测引物对C1F/C1F2或C1R/C1R2可在C1I4中扩增出257 bp或289 bp片段;用hCBS1片段两侧引物C1F8/C1R可在WT、C1I4中扩增出约977 bp条带;D：C1F/C1R在C1I4细胞中的扩增产物的测序结果示意图;E：RNA-seq数据分析比较WT和C1I4细胞中UGT1基因簇的转录水平。

Fig. 3 Effect of CRISPR inversion of hCBS1 fragment on the transcription of human UGT1 gene cluster in A549 cell line