基于核酸等温扩增的病原微生物微流控检测技术

何祥鹏,邹秉杰,齐谢敏,陈杉,陆妍,黄青,周国华

Methods of isothermal nucleic acid amplification-based microfluidic chips for pathogen microorganism detection

He Xiangpeng,Zou Bingjie,Qi Xiemin,Chen Shan,Lu Yan,Huang Qing,Zhou Guohua

表1 不同核酸等温扩增技术比较

Table 1 Summary and comparison of different nucleic acid isothermal amplification methods

扩增方式 酶组份 反应温度(℃) 反应时间(min) 引物条数 检测方式 灵敏度(拷贝) 优点 缺点 RPA T4 uvsX重组酶、Bsu聚合酶、单链结合蛋白 37~42 10~30 2 荧光探针 侧流层析 电泳 1 低温恒温、 反应迅速 引物设计规则不明、体系复杂、成本高 LAMP Bst DNA 聚合酶 65 30~60 4~6 双链嵌合染料 比浊法 碱土金属 指示剂 侧流层析 电泳 <10 体系简单、 检测方式多样、产物可 直接裸眼 检测 非特异性 扩增难以 区分 RCA 连接酶 φ29DNA 聚合酶 37 30~240 1 荧光探针 10 可进行信号放大不容易发生污染 操作步骤较多、反应时 间较长 HDA 单链结合蛋白 UvrD解旋酶 Exo-Klenow 聚合酶 37 60~120 2 双链嵌合染料 荧光探针 电泳 1 低温恒温、 高灵敏度 反应时间较长 NASBA AMV逆转录酶 RNase H T7 RNA聚合酶 41(需65℃ 95℃预热) <90 2 荧光探针 电泳 1 可直接检测RNA,防止 污染发生 需要预热, 无法真正 做到恒温