全基因组蛋白质的标签细胞和小鼠资源库建设

蒋婧, 赵安麒, 谢甜, 陈淑藯, 李劲松

Construction of genome-wide protein tagging cell and mouse libraries

Jiang Jing, Zhao Anqi, Xie Tian, Chen Shuwei, Li Jinsong

表1 3种基因改造小鼠方法的比较

Table 1 Comparison of three methods to generate gene-modified mice

特点 受精卵注射法 ES细胞介导法 “人造精子细胞”介导的半克隆技术 CRISPR/Cas9 基因编辑技术 是 是 是 质粒构建 是 是 是 细胞打靶 否 是 是,单倍体打靶效率更高 显微注射 受精卵注射 囊胚注射 卵子注射(ICAHCI) 阳性筛选形式 小鼠 细胞 细胞 中间质控 否 细胞质控确认基因型唯一性 细胞质控确认基因型唯一性 F0阳性小鼠 基因型嵌合小鼠(♂,♀) 嵌合体小鼠(♂,♀) 阳性杂合雌鼠(♀) F0小鼠阳性率 KO比例高,但小鼠基因型序列不一致;KI比例低 一般,取决于ES细胞多能性 100% F0交配 是,常规8周龄F0雌雄鼠互交或与野生型小鼠进行交配 是,常规8周龄雄鼠与野生型雌鼠进行交配 是,常规4周龄雌鼠超排后,与野生型雄鼠进行IVF F0交配次数 1次或多次(需要生殖细胞嵌合) 通常多次(需要生殖细胞嵌合) 1次 F1小鼠阳性率 <50% 低,取决于F0小鼠嵌合率 50% 技术优势 KO和点突变等基因改造效率高,平均周期6个月 细胞水平筛选阳性细胞;适用于同源重组效率低的基因改造 所有基因改造都适用;单倍体多个位点改造效率高;平均周期5~6个月 技术劣势 大片段同源重组效率低,基本不采用 周期长,失败率高,平均周期10个月 “人造精子细胞”培养要求高,技术瓶颈较高,不易掌握和推广,但能形成独有核心技术