遗传 ›› 2006, Vol. 28 ›› Issue (6): 717-720.
徐 松;张 娟;马立新
湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程研究室,武汉 430062
XU Song, ZHANG Juan, MA Li-Xin
Laboratory of Molecular Microbiology & Gene Engineering, College of Life Science, Hubei University ,Wuhan 430062, China
摘要: 构建基因组文库是一项非常基础和重要的工作。但利用传统方法构建基因组文库存在操作步骤繁琐、背景高等问题。为了解决这些问题,对传统构建文库的方法进行了改进。由于Ear I位点经酶切后突出3个可变碱基,经过设计可使酶切后的两个粘端无法匹配,从而防止载体环化,所以用两个Ear I位点作为克隆位点。基因片段是通过用Sau3AI部分酶切基因组总DNA,并在部分酶切片段的3`凹端补一个碱基G获得,因此片段无法串连或环化。本实验构建了基于上述改进的ARS探针载体pHBM803/Trp,并分别用改进方法和传统方法构建水稻基因组文库进行比较。实验结果表明,经过上述两点改进可使文库质量大大提高。