Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段的克隆、序列分析及原核表达

doi:10.1360/yc-006-1532

遗传 ›› 2006, Vol. 28 ›› Issue (12): 1532-1532~1540.doi: 10.1360/yc-006-1532

Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段的克隆、序列分析及原核表达

刘忠渊, 王芸, 吕国栋, 王贤磊, 张富春, 马纪

(新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室, 新疆生物资源基因工程重点实验室, 乌鲁木齐 830046)

收稿日期:2006-04-25 修回日期:2006-07-31 出版日期:2006-12-10 发布日期:2006-12-10
通讯作者: 马纪

Cloning, Sequencing and Prokaryotic Expression of cDNAs for the Antifreeze Protein Family from the Beetle Tenebrio molitor

LIU Zhong-Yuan, WANG Yun, LÜ Guo-Dong, WANG Xian-Lei, ZHANG Fu-Chun, MA Ji

(Key Laboratory of Molecular Biology, College of Life Science and Technology, Xinjiang University Xinjiang Key Laboratory
of Biological Resources and Genetic Engineering, Urumqi 830046, China)

Received:2006-04-25 Revised:2006-07-31 Online:2006-12-10 Published:2006-12-10
Contact: MA Ji

摘要/Abstract

摘要：

利用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法, 克隆黄粉甲虫(Tenebrio molitor)抗冻蛋白基因cDNA片段并进行序列分析和原核表达。同源性分析表明, 获得9条新cDNA片段, 与黄粉甲虫抗冻蛋白基因家族的其他基因序列具有较高的同源性。重组质粒pGEX-4T-1-tmafp-XJ430, 转化E.coli BL21进行原核表达, SDS-PAGE分析结果表明, 抗冻蛋白基因以可溶性融合蛋白表达, 相对分子量为38 kDa。构建真核表达载体pCDNA3-tmafp-XJ430, 免疫小鼠, 获得的抗血清滴度为1:2 000。Western blotting 结果为单一的条带, 证明该抗血清具有针对抗冻蛋白TmAFP-XJ430抗原的专一性。

关键词: 原核表达, 抗冻蛋白, 黄粉甲虫, 序列分析, cDNA片段

Abstract:

The partial cDNA sequence coding for the antifreeze proteins in the Tenebrio molitor was obtained by RT-PCR. Sequence analysis revealed nine putative cDNAs with a high degree of homology to Tenebrio molitor antifreeze proteins. The recombinant pGEX-4T-1-tmafp-XJ430 was introduced into E. coli BL21 to induce a GST fusion protein by IPTG. SDS-PAGE of the fusion protein demonstrated that the antifreeze protein migrated at a size of 38 kDa. The immunization was performed by intra-muscular injection of pCDNA3- tmafp-XJ430, and then antiserum was detected by ELISA.The titer of the antibody was 1:2 000. Western blotting analysis showed the antiserum was specific against the antifreeze protein. This finding could lead to further investigation of the properties and function of antifreeze proteins.

中图分类号:

刘忠渊，王芸，吕国栋，王贤磊，张富春，马纪. Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段的克隆、序列分析及原核表达[J]. 遗传, 2006, 28(12): 1532-1532~1540.

LIU Zhong-Yuan, WANG Yun, LÜ, Guo-Dong, WANG Xian-Lei, ZHANG Fu-Chun, MA Ji. Cloning, Sequencing and Prokaryotic Expression of cDNAs for the Antifreeze Protein Family from the Beetle Tenebrio molitor[J]. HEREDITAS, 2006, 28(12): 1532-1532~1540.

[1]	田子钊, 周晨希, 周伟, 李沫, 褚云鹏, 怀聪, 秦胜营. 通过时间基因表达谱分析探究异烟肼引起肝损伤的机制[J]. 遗传, 2022, 44(6): 501-509.
[2]	赫崇波，朱宝，刘卫东，鲍相渤，李云峰，单忠国，李宏俊. 虾夷扇贝脂多糖诱导的肿瘤坏死因子LITAF基因的克隆及表达分析[J]. 遗传, 2012, 34(6): 736-741.
[3]	李林，梁宏伟，李忠，罗相忠，呼光富，张志伟，朱媛媛，邹桂伟. 瓦氏黄颡鱼线粒体全基因组序列分析及系统进化[J]. 遗传, 2011, 33(6): 627-635.
[4]	邓传良，贾彦彦，任映雪，高武军，张涛，李鹏飞，卢龙斗. 离子注入诱变莲花突变体分子机理的初步研究[J]. 遗传, 2011, 33(1): 81-87.
[5]	蒋文枰，李家乐，郑润玲，汪桂玲. 褶纹冠蚌线粒体基因组全序列分析[J]. 遗传, 2010, 32(2): 153-162.
[6]	杨永霞，高磊，王艇 . 毛柄短肠蕨红/蓝光嵌合光受体基因的克隆和蛋白质结构分析[J]. 遗传, 2009, 31(7): 748-754.
[7]	郭奕斌,潘宏达,郭春苗,李咏梅,陈路明. 中国人Ⅱ型MPS家系IDS基因的一种新突变的鉴定[J]. 遗传, 2009, 31(11): 1101-1106.
[8]	班巧英，刘桂丰，王玉成，张大伟，蒋丽丽. 一个新的二色补血草金属硫蛋白基因LbMT2的克隆及其表达分析[J]. 遗传, 2008, 30(8): 1075-1082.
[9]	曾节，代寿芬，郑有良，刘登才，魏育明，颜泽洪. 带芒草属低分子量谷蛋白基因的克隆及序列分析[J]. 遗传, 2008, 30(5): 633-641.
[10]	崔羽，李景鹏. 人Artemin cDNA扩增及表达[J]. 遗传, 2008, 30(4): 448-454.
[11]	金萍，张玮玮，黄惠芳，马飞 . 日本七鳃鳗(Lampetra japonica)Lyb基因的克隆与分析[J]. 遗传, 2008, 30(12): 1597-1602.
[12]	周爽，许可，何明雄，张义正. 大肠杆菌glgC基因的定点突变及功能分析[J]. 遗传, 2008, 30(10): 1372-1378.
[13]	郭奕斌，杜传书. 中国广东Hunter综合征患者的T1140C新突变[J]. 遗传, 2006, 28(5): 521-524.
[14]	胡延春，张乃生，邓俊良，左之才，廖玉辉，欧阳红生 . α-银环蛇毒素基因的克隆及其非融合型原核表达研究[J]. 遗传, 2006, 28(4): 463-469.
[15]	刘畅，杨足君，李光蓉，冯娟，邓科君，黄健，任正隆. 叶绿体基因infA-rpl36区域在小麦族物种中的序列变异分析[J]. 遗传, 2006, 28(10): 1265-1272.

Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段的克隆、序列分析及原核表达

Cloning, Sequencing and Prokaryotic Expression of cDNAs for the Antifreeze Protein Family from the Beetle Tenebrio molitor

PDF (PC)

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics