关键词: &alpha, -银环蛇毒素, 基因克隆, 非融合原核表达, 免疫原性, 生物学活性 

Abstract:

On the basis of the reported amino acid sequence of alpha-bungarotoxin (α-BGT), DNA sequence of α-BGT was deduced and fourteen partially complementary oligonucleotides were designed and synthesized. A plasmid carrying the coding region of α-BGT was obtained by primer extension, PCR and ligation with pMD-18-T. The target fragment was digested with XbaI and EcoRI, recovered and ligated with pET28a(+).The resultant expression vector was transformed into BL21(DE3), BL21（DE3）Codon plus, and BL21（DE3）plysS, respectively. Recombinant α-BGT was expressed in BL21(DE3) and was analyzed by 15% Tris/tricine SDS-PAGE. The result showed that the recombinant protein, mostly found in inclusion bodies, accounted for 11.98% of the total bacterial lysate. The expression capacity could be increased to 16.28% by optimizing expression conditions. Western blotting results showed that the expressed protein had similar immunogenicity with the natural α-BGT protein purified from the venom of Krait Bungarus spp.. In vivo toxicity assay of purified and renatured proteins in mice showed that LD50 was about 1.28 µg/g in i.c..  

Key words: alpha-bungarotoxin,  , gene , cloning,  , non-fusion , prokaryotic , expression,  , immunogenicity,  , biological , activity