摘要： 在遗传工程中，目的基因与载体DNA进 行连接反应时，为确保这些DNA与载体重组成 功，通常需加人数倍于目的基因的载体DNA, 但是，大量加人载体DNA，由于连接反应使大 多数DNA分子自身环化［[31，在转化时产生大量 不含目的基因的转化子，而含重组DNA的转 化子则很少，需筛选大量菌落，才能得到含有重 组DNA的转化子，这样，载体的自身环化给筛 选工作带来很大的工作量。Ullich等141介绍了 一种减少载体DNA自身环化的简单方法，就是 用碱性磷酸单醋酶切除掉载体DNA 5’末端的 磷酸基151，然后再进行体外重组。经这样处理 后的载体分子，由于缺少连接酶作用的底物（5’ 磷酸基），分子之间不能相互连接，但其3‘末端 的经基可与未脱磷的外源DNA连接成缺口环 状型的重组DNA分子。采用这种方法可以大 大减少筛选时的工作量，所以碱性磷酸单醋酶 在DNA体外重组中的应用日趋广泛。我们选 用质粒四R325为模式，用细菌碱性磷酸单醋酶 处理后，转化Ecoli RRI，获得了较为满意的 结果。我们采用此法顺利地完成了国内乙型肝 炎病毒基因组与pBR325的重组工作。