野油菜黄单胞菌S-152内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

遗传 ›› 1998, Vol. 20 ›› Issue (5): 20-24.

野油菜黄单胞菌S-152内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

汪天虹1; 钟玲1; 王春卉1; 朱悦2 WANG Tian-hong1;ZHONG Ling1;WANG Chun-hui1;ZHU Yue2

1.山东大学微生物技术国家重点实验室,济南 250100 2.友谊医院病理室,北京 100050 1.National Key Microbiological Laboratory,Shandong University,Jinan 250100 2.Pathology Research Section,Friendship Hospital,Beijing 100050

收稿日期:1900-01-01 出版日期:1998-10-10 发布日期:1998-10-10

Cloning and Expression of Endoglucanase Gene of Xanthomonasecampestris in Escherichia coli

Received:1900-01-01 Online:1998-10-10 Published:1998-10-10

摘要/Abstract

摘要： 以质粒pUC9为载体,大肠杆菌JM83为宿主菌,用鸟枪法克隆到纤维素降解细菌野油菜黄单胞菌S-152的内切葡聚糖酶(CMCase)基因,克隆到的CMCas e基因位于2.7kb的HindⅢ片段上,该重组质粒命名为pUC9H-1。Southern印迹杂交分析结果显示所克隆到的内切葡聚糖酶基因与野油菜黄单胞菌染色体DNA有亲和性。对克隆株的酶学性质分析表明,其CMCase活力为0.310μmol Glu/mg蛋白·分钟,最适作用pH为6.4,最适作用温度为55℃。
Abstract:Using plasmid pUC9 as vector,Escherichia coli JM83 as host strain,an endoglucanase(CMCase)gene has been cloned by Shoot-gun method from cellulose-degrading bacteria Xanthomonas campestris S-152,The recombinant plasmid pCU9H-1 was isolated from the positive transformant producing CMCase.The CMCase gene located in a 2.7kb HindIII DNA fragment.The result of Southern hybridization indicated that the CMCase gene cloned has affinity to chromosome DNA of Xanthomonas campestris S-152.The analysis of enzymatic activity of CMCase positive clone JM83(pUC9H-1)was carried out and the result indicated that the CMCase activity was about 0.310μmol Glu/mg pro·min,the optimum pH was 6.4 and the optimum temperature was 55℃.

关键词: 野油菜黄单胞菌, 内切葡聚糖酶基因, 基因克隆
Key words, Xanthomonas campestris, Endoglucanase gene, 雄核发育, 大鳞副泥鳅, 热休克, 二倍体克隆鱼, 泥鳅

Key words: Heat shock, Paramisgurnus dabryanus, Misgurnus anguillicaudatus, Diploid clones, Androgenesis

汪天虹，钟玲，王春卉，朱悦. 野油菜黄单胞菌S-152内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达[J]. 遗传, 1998, 20(5): 20-24.

WANG Tian-hong, ZHONG Ling, WANG Chun-hui, ZHU Yue. Cloning and Expression of Endoglucanase Gene of Xanthomonasecampestris in Escherichia coli[J]. HEREDITAS, 1998, 20(5): 20-24.

[1]	陈海强, 刘会云, 王轲, 张双喜, 叶兴国. 植物单倍体诱导技术发展与创新[J]. 遗传, 2020, 42(5): 466-482.
[2]	陈建南. 分子伴侣参与调控动、植物的发育和进化进程[J]. 遗传, 2010, 32(5): 443-447.
[3]	苏辉昭，向志娇，彭方印，李瑞芳，安世琦，陆光涛，唐纪良. 十字花科黑腐病菌中影响致病相关基因XC3814表达的基因鉴定[J]. 遗传, 2010, 32(1): 81-86.
[4]	程维杰，李秋玲，王长法，王洪梅，李建斌，孙延鸣，仲跻峰. 荷斯坦牛HSP70-1基因遗传多态性与乳腺炎抗性关系[J]. 遗传, 2009, 31(2): 169-174.
[5]	徐玲花，严镇钧，曾庆韬. 大鳞副泥鳅3个Dmrt基因DM保守区的序列分析[J]. 遗传, 2008, 30(11): 1448-1452.
[6]	常重杰，周荣家，余其兴. 两种泥鳅中PdSox8和PdSox9的RFLP分析[J]. 遗传, 2000, 22(3): 153-156.
[7]	赵振山，吴清江，高贵琴. 鱼类雄核发育的研究进展[J]. 遗传, 2000, 22(2): 109-113.
[8]	王春卉，汪天虹，高培基，钟玲. 具有高外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ活力的新型黄单胞工程菌的构建[J]. 遗传, 1997, 19(5): 37-40.
[9]	常重杰，余其兴. 大鳞副泥鳅ZZ/ZW型性别决定的细胞遗传学证据[J]. 遗传, 1997, 19(3): 17-19.
[10]	肖义军，高建民，傅文庆. 大鳞副泥鳅LDH同工酶的发育遗传学研究[J]. 遗传, 1996, 18(6): 6-8.
[11]	蔡勉，刘纯强，高培基. 野油菜黄单胞菌S-152遗传转移系统的建立及外源性内切葡聚糖酶基因在其体内的表达[J]. 遗传, 1994, 16(1): 40-44.
[12]	汪天虹，刘纯强，孙晨晖高培基，王祖农. 黄单胞菌β-葡萄糖普酶基因在大肠杆菌[J]. 遗传, 1991, 13(3): 14-18.