遗传 ›› 2006, Vol. 28 ›› Issue (9): 1123-1128.
朱贵明1,2, 陈 宏1, 3, 卢建申2, 周艳荣2, 吴晓洁2, 陈红星2, 邓继先2
1. 西北农林科技大学动物科技学院, 杨凌 712100; 2. 军事医学科学院生物工程研究所, 北京 100071; 3. 徐州师范大学细胞
与分子生物学研究所, 徐州 221116
ZHU Gui-Ming1, 2, CHEN Hong1,3, LU Jian-Shen2, ZHOU Yan-Rong2, WU Xiao-Jie2,
CHEN Hong-Xing2, DENG Ji-Xian2
摘要:
人工合成基因在生命科学研究中有着重要的意义, 因此基因合成是一项常用技术。长片段基因的合成比较困难, 常常因为合成中碱基序列的错配、突变等原因而导致失败。研究者们所熟知的几种现行的方法仍然难以解决该问题。本研究在作者自身的工作经验中建立了一种新的基因合成方法, 即PCR-酶切连接法。应用该方法成功地将化学合成的27个寡聚核苷酸片段(每个片段长60~68 bp)拼接组装起来, 获得了完整的总长为1 226 bp的基因sFat-1。整个过程仅采用3轮PCR(共7个反应)、2轮的酶切连接(3个反应), 而且未曾出现任何偏离预期基因序列的差错。该方法步骤较少, 技术简单, 出错极少, 是合成长基因序列很好的选择。
中图分类号: