遗传 ›› 2007, Vol. 29 ›› Issue (8): 934-934―938.doi: 10.1360/yc-007-0934
高斌1; 肖白1; 邹起练2; 黄尚志3; 王立荣3; 钮淑兰4; 闫梅1; 雷箴1; 贾兴元1; 王战勇1; 袁海昕1; 吴燕1; 刘敬忠1
GAO Bin1; XIAO Bai1; ZOU Qi-Lian2; HUANG Shang-Zhi3; WANG Li-Rong3;
NIU Shu-Lan4; YAN Mei1; LEI Zhen1; JIA
1. Basic Medical Research Center, Capital Medical University Affiliated Beijing Chaoyang Hospital, Beijing 100020, China;
2. Department of Cell Biology and Genetics, Fujian Medical University, Fuzhou 350004, China;
3. Medical Genetics Laboratory, Institute of Basic Medical Sciences, CAMS and PUMC, Beijing 100005, China;
4. Central Laboratory, Peking University First Hospital, Beijing 100034, China
摘要:
为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断, 选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因, 以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因, 设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针, 在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB 病毒转化技术, 把唐氏综合征患者外周血B 淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件, 使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致, 接近100%, 模板浓度在3~300 ng/μL范围内, △CT值的变异系数小于15%, 浓度在30 ng/μL时, 变异系数最小(<10%), 以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好, 变异系数分别为9.8%和13.3%。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本, 正常人△CT值范围是-1.90~-1.30, 患者的△CT值范围是-2.95~-2.15, 两组之间无交叉重叠, 有明显差异(P<0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功 ,染色体核型和DNA 分析表明建系前后遗传是稳定的。因此, 实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。