常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及ADAMs相关基因的免疫筛选与序列分析

遗传 ›› 2004, Vol. 26 ›› Issue (6): 793-796.

常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及ADAMs相关基因的免疫筛选与序列分析

林俊堂¹;李玉昌²;张会勇¹;徐存拴²

1.新乡医学院细胞生物学教研室，新乡 453003;2.河南师范大学生命科学学院，新乡 453002

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-12-10 发布日期:2004-12-10

Construction of Chang Liver cDNA Library and Immunoscreening of ADAMS Related Genes

LIN Jun Tang¹; LI Yu Chang ²;ZHANG Hui Yong¹;XU Cun Shuan²

1.Department of Cell Biology, Xinxiang Medical University, Xinxiang 453003;2.College of Life Science ,Henna Normal Unvisity, Xinxiang 453002,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2004-12-10 Published:2004-12-10

摘要/Abstract

摘要： 抽提常氏肝癌细胞的总RNA，以oligo(dT)为引物，通过两次转换模板，采用LD-PCR合成全长cDNA，在cDNA两端引入SfiI的酶切位点。以λTriplEX2为载体经过包装后构建了常氏肝癌细胞cDNA表达文库。以ADAMs通用抗体，用免疫筛选技术从常氏肝癌cDNA文库中筛选出22个阳性克隆，经测序分析和BLAST检索，证实其中一个为新基因，部分区域具有蛋白酶的功能，对该基因进行了GenBank登录，获注册号为AY078070。该基因的克隆为研究ADAMs相关基因的功能奠定了基础。

关键词: 常氏肝癌细胞, cDNA文库, ADAMs抗体, 基因克隆, 免疫筛选

Abstract: Total RNA was isolated from Chang Liver cell. The full-length cDNA was synthesized using LD PCR by RNA 5^，;end switching mechanism, oligo(dT) as primer. SfiI digestion sites were introduced at both 3^，;and 5^，;end of cDNA. The cDNA was ligated with λTriplEX2 vector and packaged. Twenty-two positive clones were obtained by immunoscreening to the library, they were sequenced and blast in NCBI, one of them was identified a novel gene. It was submitted to GenBank and obtained accession nubmer AY078070. It may lay down a foundation for studying on functions of ADAMs related gene.

林俊堂，李玉昌，张会勇，徐存拴. 常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及ADAMs相关基因的免疫筛选与序列分析[J]. 遗传, 2004, 26(6): 793-796.

LIN Jun Tang, LI Yu Chang, ZHANG Hui Yong, XU Cun Shuan. Construction of Chang Liver cDNA Library and Immunoscreening of ADAMS Related Genes[J]. HEREDITAS, 2004, 26(6): 793-796.

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